流式细胞分选技术服务

流式细胞分选技术服务 服务编号：SV1401

一、简介/定义

细胞分选(cell sorting)是根据细胞所具有的特性将某种特定的细胞亚群从混合的细胞样品中分离出来的一种技术。

流式细胞分选(Flow cytometry sorting)是在流式细胞术检测细胞表型的基础上，使用充电分选技术以实现多种特定表型细胞的鉴定、分类、定量和分离。具有分选参数多、群体多、纯度高、灵活性强等优势。分选后细胞可做进一步生物学研究如单细胞测序等。

活细胞的荧光激活细胞分选(FACS)根据荧光标记将细胞群分成亚群。与非分选流式分析相比，流式细胞分选涉及更复杂的机制。使用荧光偶联抗体染色的细胞可以根据它们所染色的荧光团而彼此分离。例如，表达一种细胞标记物的细胞可以使用识别该标记物的FITC偶联的抗体来标记，而表达不同标记物的另一种细胞类型可以使用对该标记物特异的PE偶联的抗体来标记。流式细胞分选可基于不同的荧光标记将不同类型的细胞分离，这就是流式细胞分选术的基本原理。

二、 仪器介绍

       Invitrogen™ Bigfoot高速流式细胞分选仪配有Sasquatch软件(SQS)，可提供创新、易用、高速、安全的细胞分选，满足您所在实验室当前和未来的研究需求。

1. 配置有4个激光器，27个检测通道，可进行复杂的分选；

2. 配置喷嘴尺寸：70um，100um，120um，150um，可适合多种细胞分选；
3. 定制设计的集成防生物污染安全密封外壳，提供类似于 II 类生物安全柜的人员和产品保护；
4. 高速电子元件可实现 >100,000 eps 的采集速率和 >70,000 eps 的分选速率；

5. 适用多种耗材：上样管可选5ml流式管(首选)，1.5ml，15ml离心管；接收可选5ml流式管，1.5ml,  15ml，50ml离心管，6孔板，12孔板，24孔板，96孔板，384孔板，PCR 联排管，10X 基因组学芯片。

三、 仪器配置

四、 服务流程

1. Tip: 请您填写项目申请表，以便我们为您提供更好的技术服务。

2. 客户提交流式细胞分选检测请求与实验要求，与公司商定具体的实验项目、数量和费用，双方签订《委托流式细胞分选检测服务合同书》。

3. 客户提供检测样品，我公司按照协定要求安排检测项目预实验，双方根据预实验结果商定实验技术参数细节。

4. 公司实验室正式开展检测实验，在规定时间内向客户提交实验数据和检测报告。

五、 样品制备

1. 理想样品浓度：调至1-10 ×10⁶ cells/ml；

2. 样品体积：1-2ml/ 管，至少需要500ul/管；

3. 过滤条件：上机前样品必须经过35 mm的筛网过滤，去除样品中的细胞团块，以免管路堵塞；

4.  分选所用的细胞染色方法与分析所用方法基本相同，但需要注意以下几点：

a）保证样本的无菌状态，可适量添加抗生素；

b）不能使用固定剂固定细胞，因为活细胞经固定剂处理后即死亡；

c）保证上机样品为单细胞悬液；

d）准备充足的细胞；

e）建议分选上样管中的缓冲液使用含2% FBS的PBS，普通培养基中的酚红可能会干扰分选；若用培养基，颜色不能太深，血清浓度不能超过2%，否则粘性太大影响分选；f）请准备含接收液的接收管/板，其中接收液可以是：完全培养基、血清、适合细胞存活的自制缓冲液、裂解液等；

g）如要分选GFP等转染的样品，请提供未经转染的相同细胞为阴性对照；

h）如要做多重荧光染色标本的分选，需要准备空白对照（未染色的样本）、同型对照和每一种荧光通道的单染样品来调节电压和补偿（在其他仪器上获取的电压值和补偿值不通用）；为了圈门精确及验证实验，用户可以准备FMO对照和阳性对照；

i）为了排除死细胞干扰，在不影响后续实验前提下，可以加入合适的死活染料；

j）快速简便的样本处理有利于分选：处理好的样本尽快上机，分选好的细胞尽快下一步实验，如果要分选多个样本，建议一次处理一个，估计可能的上机时间后，再处理第二个样本；

k）如样本已经做过流式分析(选)，用户可以把已有的流式图发给工作人员，为分析（选）做更充分的准备。

六、特别注意

1.  由于在分选过程中，样本可能通过液滴震荡产生气溶胶，所以不接受含有会传播人类病原微生物的生物有害样本，也不接受含放射性生物样品。临床样本需提供传染病筛查检测报告，以便进行风险评估；

2. 需告知细胞的大小与形态，以便选择合适的喷嘴。所分选细胞的直径最好小于喷嘴直径的1/5，至少小于1/3。细胞的形态也会影响分选的结果，理论上越接近于球形的细胞，分选过程中的剪切力对细胞造成的伤害就越小。形态特殊的细胞应选择较大的喷嘴，以减轻分选过程对细胞造成的伤害。本机常规装载100um喷嘴，如有特殊需要，请提前与仪器负责人沟通；

3. 低含量细胞(占1%以下)的分选会导致低纯度及低回收率。建议使用者事先富集你感兴趣的细胞；

4. 本仪器以分选为主，单纯的流式分析实验建议使用分析型流式，分选前最好先使用其它流式细胞仪确认细胞阳性染色比例。如特殊情况需用本仪器分析的，请联系负责人；

5. 若是因为样本问题（如未过滤、滤网尺寸不对等），导致仪器喷嘴、上样管路等堵塞需重处理机器以及重新调节参数的情况，属于正常耗时，不予减免机时；

6. 若因机器本身故障(发生概率极低，但不是没有)造成分选不能正常进行的，目前本平台仅有一台分选仪，暂无备用机器，只能被迫终止项目，因此对于特备珍贵的样本请客户谨慎选择。

七、预约方式

1. 服务时间：工作日8:30-17:30，如有特殊时间段需求请与负责人联系确认；

2. 预约方式: 填写预约登记表邮件发送至负责人邮箱，并经负责人回复确认，不接收未预约的临时样品；

3. 送样及上机地点：北京市通州区马驹桥镇景盛南四街联东U谷西区2号院31号楼；

4. 负责人及联系方式：苗蕊 电话18246116965

5. 取消预约：最晚于预约时段前一天邮件或电话取消预约，并由负责人确认；

6. 仪器已经开机，临时失约，将正常收取开机费。

八、收费标准

请联系负责人询价。